“复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对生长獭兔生产性能、养分表观消化率、血清生化指标及毛皮品质的影响

詹海杰 曹 亮 任克良 张元庆 李燕平 党文庆 上官明军 赵瑞生 樊爱芳

(山西农业大学动物科学学院，太原030032)

獭兔，学名力克斯兔(Rex rabbit)，属于世界名贵裘皮用兔之一，以皮毛平滑整齐、手感柔软、外观绚丽而深受广大消费者的欢迎。当前我国獭兔养殖主要为自繁自养，饲养管理条件粗放，疫病防控技术水平低，导致断奶仔兔消化道疾病成为制约獭兔产业发展的主要因素[1]。断奶幼兔消化道疾病的传统防控方法为应用抗生素，但随着我国饲料端禁抗政策的实施，开发新型、高效、绿色添加剂产品已成为獭兔健康养殖的关键途径之一。酶制剂是通过生物技术产生的一类高效、绿色、无残留的活性物质，同时具有抑菌、抗氧化、降低死亡率等作用[2]。研究表明，由于酶制剂替代抗生素的功能具有条件性、辅助性和累积性的特点，只有通过不同组合酶制剂的合理配制才能达到较好的替抗效果[3]。目前酶制剂作为添加剂已广泛应用于肉鸡、蛋鸡和仔猪等畜禽的生产过程并取得了较好的效果，但应用于毛皮动物方面的研究较少[4]。二甲酸钾具有调节动物肠道菌群、生长性能等功效，在动物体内无毒、无害、无污染，应用前景十分广泛[5]。柠檬酸作为一种广泛应用的饲料酸化剂，具有促进畜禽营养物质消化吸收、降低胃肠道pH等作用。研究表明，饲粮中添加柠檬酸可以提高生长肉兔的平均日增重，降低腹泻率、死亡率，但是对屠宰性能无显著影响[6]。为探索不同酸化剂和酶制剂组合对獭兔的影响，本试验在饲粮中组合添加复合酶、柠檬酸、二甲酸钾，分析獭兔的生产性能、养分表观消化率、血清生化指标及毛皮品质等数据，以期为“复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂在毛皮动物饲粮中的应用提供理论基础。

1.1 试验材料

复合酶(木聚糖酶≥12 000 U/g，酸性蛋白酶≥5 000 U/g，β-甘露聚糖酶≥1 200 U/g，纤维素酶≥270 U/g，β-葡聚糖酶≥2 000 U/g，中温ɑ-淀粉酶≥1 200 U/g，果胶酶≥1 000 U/g，中性蛋白酶≥5 000 U/g，碱性蛋白酶≥10 000 U/g，淀粉脱支酶≥20 U/g，葡萄糖淀粉酶≥10 000 U/g)为山东某酶制剂公司产品，柠檬酸为潍坊某有限公司生产的食品级一水柠檬酸，二甲酸钾为北京某生物科技有限公司产品。

1.2 试验饲粮

对饲料原料的营养成分含量进行测定后，参考谷子林等[7]推荐的家兔营养需要进行饲粮配方设计，以玉米、麦麸、豆粕、玉米胚芽粕、苜蓿、葵花皮等饲料原料配制基础饲粮，其组成及营养水平见表1。在基础饲粮配方的基础上，分别添加不同比例的“复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂，制成3种试验饲粮。“复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂按照设定的比例添加于预混料中，搅拌均匀，通过饲料颗粒机加工成直径为5 mm的颗粒，待颗粒饲料冷却后装袋存放备用。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)

1.3 试验设计

选取健康的35日龄断奶獭兔204只，随机分为4个组，每组51只。试验设定对照组饲喂基础饲粮，高剂量组饲喂基础饲粮+0.34%复合酶+0.30%柠檬酸+0.70%二甲酸钾，中剂量组饲喂基础饲粮+0.34%复合酶+0.23%柠檬酸+0.53%二甲酸钾，低剂量组饲喂基础饲粮+0.34%复合酶+0.20%柠檬酸+0.46%二甲酸钾。预试期5 d，正试期60 d。各组獭兔均匀分布于兔笼的各层，单笼饲养。按常规程序进行饲养管理，每天饲喂1次，自由采食与饮水。兔舍自然采光、通风，各组獭兔所处小气候相同。

1.4 指标测定

1.4.1 生产性能(生长性能、屠宰性能)

将正试期第1天与第60天试验兔进行称重的数据分别作为始重与末重，每周一(08：00)在试验兔停食(不停水)12 h后称重，每日记录投料量。根据记录的数据计算平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)及料重比(F/G)。记录每日死亡的试验獭兔只数，计算死亡率。

平均日采食量(ADFI g/d)=(投料量-
余料量)/饲养天数；

平均日增重(ADG g/d)=(试验末重-
试验始重)/饲养天数；

料重比(F/G)=平均日采食量/平均日增重；

死亡率(%)=(死亡个体数/试验只数)×100。

试验结束时，从每个组选取8只(4公4母)接近于每组平均体重的试验兔，屠宰前停食(不停水)12 h后称重记录为宰前活重，然后进行屠宰，记录试验兔胴体重，并对各内脏器官分别进行称重记录。全净膛胴体重为试验兔屠宰后除去血、毛、皮、内脏、头、尾、前脚(腕关节以下)和后脚(跗关节以下)的胴体重；
半净膛胴体重为在全净膛胴体重的基础上保留心脏、肝脏、肾脏和腹脂等可食用内脏在内的胴体重。根据记录的数据计算全净膛屠宰率和半净膛屠宰率。

全净膛屠宰率(%)=(全净膛胴
体重/宰前活重)×100；

半净膛屠宰率(%)=(半净膛胴体重/
宰前活重)×100。

1.4.2 养分表观消化率

在试验结束前试验兔达95日龄时，每组各选取体重基本相同的试验兔8只(公母各占1/2)置于消化代谢笼内，采用全收粪法进行消化试验，用于测定养分表观消化率。在消化试验期内将试验兔放置于专用消化代谢笼内单笼饲喂，自由饮水。每天定期收集粪便称重并记录，收集过程中去除粪样中的饲粮、毛发等杂物，粪样置于4 ℃冰箱保存。记录每只试验兔每天的喂食量和余料量，计算耗料量；
待4 d的收粪期结束后，将粪样混匀，置于65～70 ℃鼓风干燥箱中烘至恒重，于空气中放置24 h与空气中水分平衡后，粉碎制样，过40目标准筛，检测常规养分含量。参照《饲料分析及饲料质量检测技术》[8]的方法对饲粮和粪样中各养分含量进行测定。养分表观消化率计算公式如下：

某养分表观消化率(%)=[(摄入饲粮中
该养分量-粪中该养分排出量)∕摄入
饲粮中该养分量]×100。

1.4.3 血清生化指标和免疫器官指数

试验结束前3天，每组各选8只(4公4母)试验兔进行耳静脉采血，采集的血液静置2～3 h，待血液凝固析出血清后，4 000 r/min离心8 min，收集血清装入EP管中于-20 ℃保存，用于测定血清生化指标。血清生化指标均采用山西博萃生物科技有限公司的试剂盒进行测定，其标准品线性回归与预期浓度相关系数(R2)≥0.99。

将采血后的试验兔屠宰，取下胸腺、脾脏及圆小囊，去除包围物及内容物，计算免疫器官指数。

免疫器官指数(g/kg)=免疫器官重量/宰前活重。

1.4.4 毛皮品质

试验结束时，采用谷子林等[9]的方法对所有试验兔肩部、臀部及腹部被毛长度、密度进行测定，测定3次后取平均值。将上述采血后屠宰的试验兔剥皮，臀部皮张厚度用电子游标卡尺进行测量，测量3次后取平均值。

1.5 数据统计分析

试验数据采用Excel 2010进行初步整理后，采用SPSS 20.0统计软件的one-way ANOVA程序进行单因素方差分析，并采用Duncan氏法进行多重比较。死亡率采用卡方检验，除死亡率外，其他试验结果均以平均值±标准差表示。P<0.05为差异显著，P<0.01为差异极显著。

2.1 “复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对獭兔生产性能的影响

在生长性能(表2)方面，饲粮中添加不同比例的“复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对獭兔的末重、平均日采食量未产生显著影响(P>0.05)；
平均日增重以低剂量组最高，显著高于对照组(P<0.05)，与高剂量组、中剂量组差异不显著(P>0.05)；
料重比以低剂量组最低，与对照组差异显著(P<0.05)，与高剂量组、中剂量组差异不显著(P>0.05)；
死亡率以低剂量组最低，但各组间差异不显著(P>0.05)。

表2 “复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对獭兔生长性能的影响

在屠宰性能(表3)方面，各组之间獭兔的宰前活重差异不显著(P>0.05)；
胴体重、半净膛屠宰率、全净膛屠宰率均以低剂量组最高，与中剂量组差异显著(P<0.05)，对照组与高剂量组、中剂量组之间差异不显著(P>0.05)。

表3 “复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对獭兔屠宰性能的影响

2.2 “复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对獭兔养分表观消化率的影响

由表4可知，各组之间獭兔的干物质、淀粉、粗灰分、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维表观消化率无显著差异(P>0.05)；
低剂量组獭兔的粗蛋白质、粗脂肪表观消化率显著高于对照组(P<0.05)，与高剂量组、中剂量组差异不显著(P>0.05)。

表4 “复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对獭兔养分表观消化率的影响

2.3 “复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对獭兔血清生化指标和免疫器官指数的影响

由表5可知，各组之间獭兔的血清总胆固醇、无机磷、肌酐、总蛋白、白蛋白、高密度脂蛋白含量差异不显著(P>0.05)；
低剂量组血清甘油三酯含量与对照组、高剂量组差异不显著(P>0.05)，但显著低于中剂量组(P<0.05)；
中剂量组血清葡萄糖含量最高，与对照组差异显著(P<0.05)，与低剂量组和中剂量组无显著差异(P>0.05)；
高剂量组血清钙含量最高，极显著高于中剂量组(P<0.01)，与对照组、低剂量组差异不显著(P>0.05)；
血清尿素/尿素氮含量以对照组最低，极显著低于各试验组(P<0.01)，各试验组之间差异不显著(P>0.05)；
低剂量组血清低密度脂蛋白含量最低，与对照组、高剂量组无显著差异(P>0.05)，与中剂量组差异极显著(P<0.01)。

表5 “复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对獭兔血清生化指标的影响

獭兔免疫器官指数结果(表6)显示，饲粮中添加不同比例的“复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对獭兔的各免疫器官指数均未产生显著影响(P>0.05)。

表6 “复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对獭兔免疫器官指数的影响

2.4 “复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对獭兔毛皮品质的影响

獭兔毛皮品质结果(表7)显示，中剂量组和低剂量组獭兔肩部、腹部被毛长度差异不显著(P>0.05)，但均极显著高于对照组和高剂量组(P<0.01)；
低剂量组獭兔臀部被毛最长，与对照组、高剂量组和中剂量组差异极显著(P<0.01)，对照组与高剂量组之间无显著差异(P>0.05)，但均显著低于中剂量组(P<0.05)；
低剂量组獭兔肩部被毛最密，与对照组和高剂量组差异极显著(P<0.01)，与中剂量组差异显著(P<0.05)，对照组与高剂量组之间无显著差异(P>0.05)；
各组之间的獭兔臀部、腹部被毛密度无显著差异(P>0.05)；
低剂量组獭兔臀部皮张厚度极显著高于对照组、高剂量组和中剂量组(P<0.01)，对照组、高剂量组和中剂量组之间无显著差异(P>0.05)。

表7 “复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对獭兔毛皮品质的影响

3.1 “复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对獭兔生产性能的影响

饲料中添加酶制剂可以提高养分利用率，促进动物生长及营养物质的吸收[10]。李奎等[11]在安格斯肉牛补充精料中分别添加3种剂量相同品牌不同的复合酶制剂，结果表明复合酶制剂提高了粗饲料纤维消化率，增加了安格斯肉牛的平均日增重。在獭兔养殖方面，幼兔消化机能未发育健全，不能充分利用饲粮中的营养物质，仔兔断奶后容易出现消化不良、腹泻、生长缓慢等一系列疾病甚至死亡，而“复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂的使用改善了幼兔生长性能的相关指标。研究发现，酶制剂添加于生长獭兔饲粮中能够促进獭兔生长，降低饲粮消耗[12]。獭兔饲粮中添加外源酶不仅可以显著提高30日龄的日增重，还可以降低料重比，并使生长前期獭兔每千克增重饲料成本有所降低[13]。柠檬酸能降低动物胃肠道的酸碱度，改善胃肠道的微生态环境。研究显示，在饲粮中添加一定量的柠檬酸能提高金凤凰鸡的饲料利用效率[14]。在母猪基础饲粮中添加不同剂量的柠檬酸，可在一定程度上提高仔猪断奶均体质量，改善哺乳母猪的生产性能[15]。Ragaa等[16]报道，在肉鸡饲粮中添加0.5%的二甲酸钾可提高肉鸡的体增重和屠宰性能，显著降低料重比。Upadhaya等[17]试验发现，将有机酸化剂添加于断奶仔猪饲粮中可以提高仔猪的平均日增重，改善料重比。研究表明，饲粮中添加二甲酸钾能显著提高肉鸡的增重速度，改善料重比，并提高饲料利用率[18]。在獭兔上，费洪标等[19]试验证实，在断奶獭兔饲粮中添加酸化剂可以提高獭兔的平均日增重，改善消化酶活性，降低料重比与腹泻死亡率。以上研究结果表明复合酶、柠檬酸和二甲酸钾的添加可以提高畜禽的生长性能，降低腹泻率和死亡率。

有关添加剂组合方面的研究表明，在肉兔饲粮中混合添加葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶和柠檬酸对肉兔的末重、平均日增重、平均日采食量及料重比无显著影响[20]，说明酶制剂与酸化剂的组合对畜禽生产性能的协同作用有限。而将酸化剂、复合酶制剂和益生素3种制剂应用于肉鸡的试验发现，添加一定比例的上述制剂组合物可起到改善肉鸡生产性能、免疫性能的作用[21]；
益生菌、酸化剂、精油、复合酶的组合试验发现，4种成分的混合使用可以显著提高断奶仔猪的末重和平均日增重，降低料重比[22]，以上试验结果表明，酶制剂、酸制剂与其他组分组合可以有效地提高畜禽的生长性能。基于以上试验结果，鉴于单酸、单酶在畜禽生产上的效果有限，为了更合理、有效利用酶制剂和酸化剂提高獭兔的相关指标，本试验将复合酶、柠檬酸和二甲酸钾组合添加到獭兔基础饲粮中，结果发现不同剂量的“复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂均可提高獭兔的平均日增重，降低料重比与死亡率，且随着添加剂量的适当减少效果更显著；
同时发现不同剂量的“复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对獭兔屠宰性能影响显著，其中低剂量组对屠宰性能的改善效果最佳。本试验中组合添加复合酶、柠檬酸和二甲酸钾与前人研究中单独添加柠檬酸[6]进行对比发现，前人研究中柠檬酸的添加对肉兔的屠宰性能无显著影响，而本试验中组合添加剂的添加则显著提高了獭兔的胴体重、半净膛屠宰率和全净膛屠宰率；
从成本角度分析，獭兔饲粮的成本按本试验中“复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂的最适剂量(低剂量组)计算，与单独添加1.5%柠檬酸的肉兔饲粮的成本基本相同。上述结果说明“复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对家兔屠宰性能的影响要优于单酸。

3.2 “复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对獭兔养分表观消化率的影响

养分表观消化率是畜禽肠道整体机能强弱的指标，可通过衡量养分表观消化率数值的大小，了解畜禽对饲粮的消化能力[23]。王杰等[24]的研究表明，在仔猪饲粮中添加包含柠檬酸的复合酸化剂可以提高粗蛋白质和干物质的表观消化率。刘正群等[25]发现，在仔猪饲粮中添加复合有机酸对粗蛋白质的表观消化率无显著影响，但显著提高了粗脂肪、钙和磷的表观消化率，且有提高粗纤维表观消化率的趋势。陈焱等[26]在肉鸡饲粮中添加二甲酸钾，结果发现二甲酸钾可以显著提高肉鸡部分养分的表观利用率。酶制剂应用于家兔方面已有一些研究。邵乐等[27]研究显示，饲粮中添加酶制剂可提高5月龄獭兔的生长性能和养分消化率。郭肖兰等[28]研究显示，饲粮中添加3个剂量的复合酶制剂显著提高了獭兔的粗蛋白质、粗纤维及粗脂肪的表观消化率，但对干物质、粗灰分、钙、磷表观消化率无显著影响。在组合添加剂方面的研究显示，果寡糖、菊粉组合可有效提高断奶仔猪的养分表观消化率[29]；
在肉兔饲粮中混合添加葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶和柠檬酸对粗灰分、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维表观消化率的影响较小[20]。本试验结果与前人的研究结果相似，不同剂量的“复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对獭兔干物质、淀粉、粗灰分、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维表观消化率的影响不显著，但对粗蛋白质、粗脂肪的表观消化率有显著影响，且以低剂量组的粗蛋白质、粗脂肪表观消化率最高。至于组合添加剂对不同养分表观消化率的影响不尽一致，其作用机制还有待于进一步分析研究。

3.3 “复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对獭兔血清生化指标和免疫器官指数的影响

血清是血液凝固后析出的液体，其成分与血液相似，日常生产中可通过测定血清生理生化指标来分析动物机体组织机能的状态。葡萄糖是动物机体功能的重要物质，在通常情况下，动物血液中的葡萄糖含量是相对稳定的，其含量过高或者过低对于动物机体都有很大影响。血清中胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白的含量均为反映动物脂肪代谢的重要指标。血清甘油三酯的含量与机体脂肪沉积、分解紧密相关，血清胆固醇的含量能够反映机体脂类吸收以及代谢的情况。殷继勋[30]发现，在饲粮中添加复合酸化剂能显著降低肉鸡血清中甘油三酯、总胆固醇的含量，血清中葡萄糖的含量也有所降低但是差异不显著，同时发现高密度脂蛋白、低密度脂蛋白含量的差异不显著，这说明复合酸化剂能在一定程度上促进机体脂肪的代谢，减少脂肪沉积。血清中的总蛋白和白蛋白是主要的转运蛋白，其含量是反映动物机体蛋白质代谢水平的重要指标。刘干[31]研究发现，饲粮中添加复合酶制剂对肉鸡血液生化指标有显著影响，表现为提高了肉鸡血清白蛋白和总蛋白含量。在仔猪饲粮中添加二甲酸钾对血清中高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇、甘油三酯和葡萄糖含量等生化指标的影响不显著[32]。杨久仙等[33]的试验结果表明，仔猪饲粮中添加0.2%和0.3%的酶制剂可显著降低血清尿素氮含量，同时未发现酶制剂对仔猪血清中葡萄糖含量存在显著影响。有关组合添加剂方面的研究显示，葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶和柠檬酸组合添加使得肉兔胸腺重量、脾脏重量和脾脏指数提高[20]；
活性酵母和复合酶增强了荷斯坦奶公犊的血清抗氧化能力[34]。本试验中，“复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对獭兔血清总胆固醇、高密度脂蛋白含量的影响不显著，而对甘油三酯、低密度脂蛋白、总蛋白、白蛋白、葡萄糖含量5个指标存在显著影响，出现这种情况可能与本试验添加的组合添加剂的种类、配比及剂量有关，其原因有待于进一步研究分析。

动物的胸腺、脾脏和圆小囊是重要的免疫器官，其生长发育及质量在一定程度上可以反映动物的免疫能力。不同酶制剂与酸化剂有使动物免疫器官的重量增加的趋势。吴艳芳等[35]研究显示，断奶仔兔饲粮中添加酶制剂后，各组间胸腺重量、脾脏重量、胸腺指数和脾脏指数差异均不显著，但随着酶制剂添加量的增加，胸腺重量、脾脏重量和脾脏指数呈现逐渐增高的趋势；
陈焱等[26]在肉鸡饲粮中添加二甲酸钾后发现胸腺指数显著提高，脾脏指数有增高趋势，说明添加二甲酸钾可以改善肉鸡的免疫功能；
但是任鋆等[36]的试验发现，饲粮中添加柠檬酸后21日龄肉鸡胸腺、脾脏和法氏囊指数无显著变化，说明饲粮中添加柠檬酸对肉鸡免疫器官指数没有产生显著影响。为了充分明确添加剂的组合优势，本试验将复合酶、柠檬酸、二甲酸钾以不同剂量组合添加到獭兔饲粮中，结果发现3种剂量的组合添加提高獭兔的生产性能，但对獭兔的胸腺指数、脾脏指数、圆小囊指数的影响不显著。基于以上试验结果，“复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对獭兔免疫器官指数的影响仍需进一步深入分析研究。

3.4 “复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂对獭兔毛皮品质的影响

獭兔作为一种典型的皮肉兼用品种，毛皮品质的好坏直接影响商品价值和经济效益。獭兔皮张质量评定包括被毛密度、毛丛长度、被毛色泽、皮张厚度和面积等。高振华等[37]研究发现，复合酶制剂的添加对35和90日龄獭兔的皮张厚度及被毛密度都有不同程度的影响，但效果不够显著。陈赛娟等[38]研究显示，饲粮中添加0.05%～0.20%的单宁酸对生长獭兔被毛品质、皮张品质的影响不显著，且不会对獭兔毛皮品质产生不良的影响。以上结果说明饲粮中单独添加复合酶制剂和单一酸制剂对獭兔毛皮品质的影响较小，而将多种添加剂组合应用于皮毛动物的研究较少。为了进一步了解多种添加剂组合添加后对皮毛动物毛皮品质的影响，本试验将复合酶、柠檬酸、二甲酸钾组合添加到獭兔饲粮中，结果发现该组合添加剂可以显著提高獭兔肩部、臀部、腹部被毛长度及肩部被毛密度、臀部皮张厚度，但对獭兔肩部、臀部被毛密度的影响较小，说明“复合酶+柠檬酸+二甲酸钾”组合添加剂与单一复合酶或单一酸制剂相比能有效改善獭兔的毛皮品质，但试验所用的3种添加剂的协同作用机制仍需进一步研究。

综合考虑獭兔的生长性能、屠宰性能、死亡率、养分表观消化率、血清生化指标及被毛长度、臀部皮张厚度等指标，本试验条件下，生长獭兔饲粮中添加0.34%复合酶+0.20%柠檬酸+0.46%二甲酸钾的组合添加剂效果较好。

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