欧李增殖培养基优化的研究

李月胜，陈申宽，张赭苒，牟玉杰，庞龙，孙秀殿

(1.扎兰屯职业学院，内蒙古扎兰屯162650；
2.呼伦贝尔科技特派员创新创业协会， 内蒙古海拉尔021000)

欧李[Cerasushumilis(Bge.) Sok.]。因果实含钙高又称高钙果。蔷薇科樱属灌木植物，高0.4～1.5 m。小枝灰褐色或棕褐色，被短柔毛。冬芽卵形，疏被短柔毛或几无毛。叶片倒卵状长椭圆形或倒卵状披针形，长2.5～5 cm，宽1～2 cm，中部以上最宽，先端急尖或短渐尖，基部楔形，边缘有单锯齿或重锯齿，上面深绿色，无毛，下面浅绿色，无毛或被稀疏短柔毛，侧脉6～8对；
叶柄长2～4 mm，无毛或被稀疏短柔毛；
托叶线形，长5～6 mm，边有腺体。花单生或2～3花簇生，花叶同开；
花梗长5～10 mm，被稀疏短柔毛；
萼筒长宽近相等，约3 mm，外面被稀疏柔毛，萼片三角卵圆形，先端急尖或圆钝；
花瓣白色或粉红色，长圆形或倒卵形；
雄蕊30～35枚；
花柱与雄蕊近等长，无毛。核果成熟后近球形，红色或紫红色，直径1.5～1.8 cm；
核表面除背部两侧外无棱纹。花期4～5月，果期6～10月。

欧李具有特殊的抗旱本领，适合干旱地区种植。旱时能避旱，雨季能蓄积水。在干旱的春季，欧李不仅叶片含水量较高，而且保水力强。欧李叶片小而厚，虽然气孔密度大，但气孔小，水分散失的少。在干旱季节地上部生长速度减缓，土壤植株基部产生多量基生芽，这些芽不萌发，一旦遇到降雨时基生芽可形成地下茎在土壤中伸长，形成根状茎或萌出地表形成新的植株。这种生理特点是欧李抗旱的内在因素。

欧李常见的繁殖方法主要有播种、分株、扦插和嫁接，但是由于种子处理比较繁琐，播种繁殖比较困难；
分株繁殖系数又比较低，嫩枝扦插成活率也不高，所以利用组织培养技术可以快速提供大量苗木。

欧李组培苗继代增殖的周期和增殖的倍数是工厂化生产的保证， 试验以愈伤组织产生的丛生苗作为材料，通过基本培养基筛选、细胞分裂素筛选和生长素的筛选，提高增殖扩繁的速度，为今后欧李组培苗规模化增殖扩繁培养提供现实依据。

2.1 材料

欧李增殖材料来自2018年3月份扎兰屯职业学院组培室的无菌组培苗。

2.2 方法

2.2.1 基本培养基的选择。从欧李组培增殖最常用的WPM、1/4MS及Read三种培养基中选取，以MS培养基为对照，激素均为1.0 mg/L ZT+0.5 mg/L NAA。试验设4个处理，每个处理做30个样本，3个重复，定期观察记录，30天后统计增殖周期和增殖倍数。

2.2.2 细胞分裂素的筛选。从初步筛选出的ZT、TDZ和6-BA中选择。基本培养基为Read+1.0 mg/L NAA，其因素水平表见表1。

表1 细胞分裂素的筛选因素水平表

其试验方案的设计采用正交试验设计法，选用三因素四水平正交表L16(43) ,见表2。

表2 细胞分裂素的筛选三因素四水平正交表 L16(43)

2.2.3 生长素的筛选。生长素类主要从最常用的NAA和IBA两种中选出，其基本培养基采用Read+1.0 mg/L ZT因素水平表见3

表3 生长素的筛选因素水平表

2.2.4 培养条件及数据分析处理。以上各阶段都是在23～27 ℃，光照强度2000～3000 lx，光照时间12 h/d，相对湿度60%～80%条件下培养，每组实验的每个处理做30个样本，3个重复，定期观察、记录 ，30天后统计诱导数据和诱导率。试验中培养基配方方案均采用正交设计，数据采用SPSS软件分析。

3.1 基本培养基选择

经过30天的培养统计欧李丛生芽增殖情况见表4。

表4 基本培养基选择欧李丛生芽增殖倍数统计表

从表4可知增殖倍数从大到小的顺序是Read,1/4MS、WPM、MS，其增殖倍数依次为3.3、3.2、2.7、2.1.由此可见Read和1/4MS培养基更适合欧李丛生芽的增殖培养，WPM和MS培养基增殖倍数也达到2以上，也可以用于丛生芽的增殖培养。

3.2 细胞分裂素选择

经过30天的培养统计欧李丛生芽增殖情况见表5

表5 欧李增殖细胞分裂素筛选增殖倍数统计表

由表5可知增殖倍数最高的是处理9，及培养基1/4MS+0.5 mg/L ZT+0 mg/L TDZ+2.5 6-BA+1.0 mg/L NAA,增殖倍数为2.9，其次为处理6、处理11和处理5，其增殖倍数都在2.5以上，他们皆可作为欧李增殖用的培养基。其他处理增殖倍数都在2.5以下，不建议作为增殖培养基。

3.3 生长素的选择

生长素的筛选结果见表6

表6 欧李增殖生长素筛选增殖倍数统计表

由表6可见增殖倍数由高到低依

次为处理3、处理1、处理4、处理5和处理2， 增殖倍数分别为2.5、2.3、2.2、2.0、1.7，所以处理3最适合欧李的增殖培养，处理3的培养基为1/4MS+1.0 mg/L ZT+0.4 mg/L NAA+0 mg/L IBA。由此可见生长素NAA比IBA更适合作为欧李增殖用的激素。

在基本培养基筛选中，适合欧李增殖最佳培养基是Read和1/4MS培养基。

在细胞分裂素筛选中，适合欧李增殖培养的激素是ZT,ZT的使用浓度是0.5～1 mg/L 。

生长素的选择中NAA比IBA更适合作为欧李增殖用的激素，0.4～1 mg/L NAA。

综上所述，欧李丛生芽增殖的最适基本培养基为Read培养基。最适细胞分裂素为ZT，使用浓度为1 mg/L 。最适生长素为NAA，使用浓度为0.5 mg/L。从而可知欧李丛生芽增殖培养的最适培养基是Read+1 mg/L ZT+0.5 mg/L NAA。

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